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ELISA实验的分类
来源于:欧冠体育【中国】有限公司官网,浙江联硕生物科技有限公司 | 发布时间:2023/12/27 17:22:00

直接法(Direct ELISA)

原理:将抗原或抗体固定于酶标板上,然后用酶标抗体或抗原直接检测。

直接法将抗原或抗体固定到酶标板上,用带有酶标记的一级抗体或一级抗原,与之特异性结合,再利用酶催化底物显色,即可测定总靶标蛋白的含量。

 

间接法(Indirect ELISA)

原理:将抗原或抗体固定于酶标板上,随后分两步进行检测:首先加入检测抗体或抗原进行特异性结合,随后加入酶标二抗检测并利用底物显色。

间接法常用于检测抗体。将抗原固定到酶标板上,加入一抗,与抗原特异性结合,再加入带有酶标记的二抗,使二抗与一抗特异性结合,最后加入底物,使底物与酶反应显色,即可测定总靶标蛋白的含量。

 

夹心法(Sandwich ELISA)

夹心法分为双抗体夹心法和双抗原夹心法。

双抗体夹心法:此方法常用于检测抗原。将抗体固定在固相载体上,加入待测抗原,与抗体特异性结合,再加入酶标抗体检测,并利用底物显色,即可测定总靶标蛋白的含量。

双抗原夹心法:反应模式与双抗体夹心法类似,用固相抗原和酶标特异性抗原,分别代替固相抗体和酶标特异性抗体,即可测定样品中的抗体。

夹心法ELISA的显色结果与待检抗原(或抗体)的量成正比。

 

竞争法(Competitive ELISA)

原理:样本中的抗原及预包被的酶标抗原,竞争性地与固相抗体相结合。样本中的抗原含量越多,结合在固相上的酶标抗原就越少,最终显色也越浅。需要注意的是,显色结果与待检抗原(或抗体)的量成反比。

预先将抗原包被在固相载体上,并加入酶标记的特异性抗体。实验时,加入待检抗原(或抗体),如果待检物是抗原,则待检抗原与预先包被在固相载体上的抗原竞争结合酶标抗体;如果待检测物是抗体,则待检抗体就与系统中原有的酶标抗体竞争结合包被在固相载体上的抗原。通过洗涤洗掉被竞争结合的酶标抗体,最后加底物显色。

竞争法显色结果与待检抗原(或抗体)的量成反比,且适用于测定只有一个识别位点的小分子物质。

 

*以上内容来自网络

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